Иммунотерапия

Моноклональные антитела (мАТ) производятся in vitro для распознавания специфических антигенов (АГ)-мишеней; они используются для лечения солидных и гемопоэтических опухолей, воспалительных процессов и инфекций. Большинство клинически используемых мАТ нацелены на один антиген, но некоторые из них разработаны биспецифичными. Моноклональные антитела, клинически применяемые в настоящее время, включают:

• Мышиные

• Химерные

• Гуманизированные

• Полностью человеческий

Мышиные мАТ получают путем введения мышам заданного АГ, после чего из их селезенки берутся В-клетки, способные вырабатывать АТ, специфичные к этому заданному АГ, объединяют эти клетки с бессмертными клетками миеломы мышей; получив таким образом гибридные клетки, их культивируют и получают продуцируемые ими АТ. Клиническое применение мышиных АТ ограничено, поскольку они индуцируют выработку антимышиных АТ, что может привести к болезни иммунных комплексов (реакция гиперчувствительности III типа), слабо активируют АПК и Т-лимфоциты и быстро выводятся.

Чтобы свести к минимуму проблемы, возникающие при использовании мышиных мАТ исследователи используют методики рекомбинантных ДНК для производства моноклональных антител, которые являются частично человеческими и частично мышиными. В зависимости от того, какую часть в составе АТ составляют человеческие молекулы, конечный продукт называют:

• Химерным

• Гуманизированным

В обоих случаях процесс обычно начинается как ранее описано, с производства мышиных клеточных гибридом, которые производят АТ специфичные к определенному АГ. Затем ДНК нескольких или всех вариабильных участков мышиного АТ сшивается с ДНК человеческого иммуноглобулина. Полученную ДНК помещают в клеточную культуру млекопитающих, которая затем экспрессирует конечный ген, продуцирующий желаемое АТ. Если часть мышиного гена по всему вариабельному участку сшита с частью гена человеческого константного региона, то антитела, вырабатываемые в результате активности такого гена, называются «химерными». Если мышиный ген используют только для АГ-связывающего участка гипервариабельного региона в составе вариабельного региона, антитела называются «гуманизированными».

Химерные моноклональные антитела активируют антиген-презентирующие клетки (АПК) и Т-клетки более эффективно по сравнению с мышиными моноклональными антителами, но способны индуцировать продукцию человеческих антихимерных антител.

Гуманизированные моноклональные антитела против различных антигенов (АГ) доступны к применению в лечении колоректального рака, рака груди, лейкоза, аллергий, аутоиммунных патологий, отторжения трансплантатов и респираторной-вирусной синцитиальной инфекции.

Полностью человеческие мАТ получают с использованием трансгенных мышей, которые содержат гены человеческого иммуноглобулина или с использованием метода фагового дисплея (т.е., клонирования белков с помощью бактериофага) по отношению к генам иммуноглобулинов, выделенных из В-клеток человека. Полностью человеческие моноклональные антитела имеют сниженную иммуногенность и, следовательно, оказывают меньше побочных эффектов у пациентов.

Моноклональные антитела, которые нацелены на молекулы контрольных точек как Т-клеток, так и опухолевых клеток (так называемые ингибиторы контрольных точек – см. таблицу Клиническое использование некоторых иммунотерапевтических агентов [Some Immunotherapeutic Agents in Clinical Use]) используются для предотвращения подавления противоопухолевых реакций и эффективного лечения некоторых резистентных до настоящего времени типов раковых заболеваний. Однако поскольку молекулы контрольных точек также принимают участие в иных типах иммунного ответа, ингибиторы контрольных точек могут вызывать тяжелые формы иммуноопосредованного воспалительного процесса и аутоиммунные ответы (как системные, так и специфические).

Данные гибридные белки получены посредством слияния генетических последовательностей, кодирующих целиком или частично синтез 2 различных белков; в итоге они будут кодировать желаемые свойства обеих исходных молекул (например, антиклеточный компонент в сочетании с клеточным токсином). Фармакокинетические свойства терапевтических белков могут быть улучшены сшивкой с другими полипептидами с более длительным периодом полувыведения (например, Fc область IgG).

Растворимые варианты рецепторов цитокинов используются как терапевтические реагенты. Они способны блокировать действие цитокинов, связываясь с ними до того, как они прикрепятся к нормальному рецептору клетчной поверхности.

Этанерцепт – фузионный протеин, состоящий из двух сшитых идентичных цепей CD120b-рецепторов фактора некроза опухоли (ФНО)-альфа. Таким образом, данный биологический агент блокирует ФНО-альфа и применяется для лечения ревматоидного артрита, полиартикулярного ювенильного идиопатического артрита, анкилозирующего спондилита, псориатического артрита и бляшечного псориаза.

Растворимые рецепторы интерлейкинов (рецепторы IL-1, IL-2, IL-4, IL-5 и IL-6) разрабатываются для лечения воспалений, аллергий и онкологических заболеваний.

Колониестимулирующие факторы (КСФ), такие, как эритропоэтин, гранулоцитарный КСФ (Г-КСФ) и КСФ гранулоцитов-макрофагов (ГМ-КСФ) применяют для лечения пациентов, получающих химиотерапию, или после трансплантаций при заболеваниях крови или онкопатологиях и пациентов, имеющих хроническую нейтропению тяжелой степени (см. таблицу Клиническое применение некоторых иммунотерапевтических агентов [Some Immunotherapeutic Agents in Clinical Use]). Интерферон-альфа (ИФН-альфа) и ИФН-гамма применяются при лечении рака, иммунодефицитных состояний и вирусных инфекций; ИФН-бета применяется при лечении рецидивирующего рассеянного склероза. Многие другие цитокины находятся в стадии изучения.

Анакинра (в РФ не зарегистрирована), используемая в лечении ревматоидного артрита, является рекомбинантным, слегка модифицированным негликозилированным антагонистом рецептора IL-1R; данный препарат прикрепляется к рецептору IL-1, тем самым, предотвращая связывание IL-1, но в противоположность IL-1 не активирует рецептор.

Клетки, экспрессирующие рецепторы цитокина, могут быть мишенями для модифицированных вариантов данного цитокина (а именно, денилейкин-дифтитокс (в РФ не зарегистрирован) – белок слияния, содержащий последовательности IL-2 и токсина дифтерии). Денилейкин (в РФ не зарегистрирован) используется при кожной Т-клеточной лимфоме, нацеливая токсин на клетки, экспрессирующие компонент CD25 рецептора IL-2.

Малые линейные пептиды, циклические пептиды и малые органические молекулы в настоящее время изучаются как агонисты или антагонисты широкого спектра действия. Скриниговые лаборатории пептидов и органических компонентов идентифицируют потенциальные миметики (например, агонисты рецепторов эритропоэтина, тромбопоэтина и колоние-стимулирующего фактора гранулоцитов).

Клетки иммунной системы больного обрабатывают (например, лейкаферезом) и активируют in vitro, а затем вновь вводят больному. Цель данного метода лечения состоит в том, чтобы усилить обычно недостаточный естественный иммунный ответ при раке. Методы активации клеток иммунитета включают использование цитокинов для стимуляции и увеличения числа противоопухолевых цитотоксических Т-лимфоцитов и пульсированного представления антиген-презентирующим клеткам, например, дендритным, опухолевого антигена. Перед тем как быть возвращенными пациенту, Т-клетки могут быть генетически сконструированными на экспрессию химерных антигенных рецепторов (CAR) или Т-клеточных рецепторов (TCR), способных распознавать опухолевые антигены; данный подход показал свою эффективность среди пациентов с лейкозом, а также в случае с лимфомой.