Справочник Msd

Подтвердите, что вы являетесь специалистом в области здравоохранения

honeypot link
Предоставлено Вам This site is not intended for use in the Russian Federation

Микроскопия

Авторы:

Maria T. Vazquez-Pertejo

, MD, FACP, Wellington Regional Medical Center

Проверено/пересмотрено окт 2022
Вид
Ресурсы по теме

Световая микроскопия может быть сделана быстро, но точность зависит от опыта работника лаборатории и качества оборудования. Инструкции часто ограничивают использование врачами микроскопии в диагностических целях вне сертифицированной лаборатории.

Может потребоваться микроскопическое исследование тканей, чтобы отличить инвазивное заболевание от поверхностной колонизации — это различие сложно установить с помощью метода культивирования.

Большинство образцов обрабатывают специальными красителями, которые окрашивают болезнетворные микроорганизмы, что позволяет выделить их на общем фоне, хотя для выявления грибов и некоторых других патогенов, также могут использоваться влажные препараты Срезы нефиксированной ткани (влажные препараты) Световая микроскопия может быть сделана быстро, но точность зависит от опыта работника лаборатории и качества оборудования. Инструкции часто ограничивают использование врачами микроскопии в... Прочитайте дополнительные сведения Срезы нефиксированной ткани (влажные препараты) неокрашенных образцов.

Врач назначает проведение окрашивания, основанное на вероятных возбудителях. Тем не менее, никакое окрашивание не является на 100% специфичным (т.е., различные микроорганизмы могут окрашиваться одинаково). Большинство образцов обрабатывают окрашиванием по Граму Окрашивание по Граму Световая микроскопия может быть сделана быстро, но точность зависит от опыта работника лаборатории и качества оборудования. Инструкции часто ограничивают использование врачами микроскопии в... Прочитайте дополнительные сведения  Окрашивание по Граму , а если подозреваются микобактерии, то кислотостойким окрашиванием Кислотостойкие и модифицированные кислотостойкие красители Световая микроскопия может быть сделана быстро, но точность зависит от опыта работника лаборатории и качества оборудования. Инструкции часто ограничивают использование врачами микроскопии в... Прочитайте дополнительные сведения  Кислотостойкие и модифицированные кислотостойкие красители . Однако некоторые болезнетворные микроорганизмы нелегко увидеть при использовании этих методов, тогда в таких случаях требуются различные варианты окрашивания или другие методы идентификации.

Поскольку микроскопическое обнаружение обычно требует концентрации микробов по меньшей мере около 1 ×104-5/мл, большинство образцов биологической жидкости (например, спинномозговая жидкость) перед исследованием концентрируются (например, центрифугированием).

Окрашивание по Граму

Окрашивание по Граму обеспечивает следующее:

  • Классифицирует бактерии в соответствии с тем, дают ли они прочное соединение с кристаллвиолетом при окрашивании этим красителем или нет (грамположительные окрашиваются в синий цвет, грамотрицательные – в красный)

  • Позволяет определить морфологию клеток (например, бациллы, кокки) и их расположение относительно друг друга (например, скопления, цепочки, диплоиды)

  • Идентифицируют полиморфноядерные лейкоциты, указывая на бактериальную инфекцию, а не на колонизацию

Данные характерные черты микроорганизмов могут быть основанием для назначения той или иной антибактериальной терапии в период, предшествующий окончательной идентификации. После окраски по Граму обнаружение в образце смеси микроорганизмов с различными морфологическими характеристиками и окрашиванием предполагает зараженный образец или полимикробный характер бактериальной инфекции. Обнаружение большого количества плоскоклеточных клеток в образце мокроты позволяет предположить, что он загрязнен слюной и поэтому имеет ограниченную диагностическую ценность.

Для окрашивания по Граму лаборанты фиксируют материал образца на предметном стекле путем нагревания, а затем окрашивают его, последовательно обрабатывая образец кристаллическим фиолетовым красителем Грама, йодом, обесцвечивающим реагентом и контрастирующим красителем (как правило, сафранином).

Кислотостойкие и модифицированные кислотостойкие красители

Эти красители используются для идентификации следующих микроорганизмов:

Хотя обнаружение микобактерий в мокроте требует не менее 10 000 микроорганизмов/мл, а микобактерии часто присутствуют в организме человека в меньших концентрациях, таким образом, чувствительность метода весьма ограничена. Обычно несколько мл мокроты дезактивируют гидроокисью натрия и концентрируют центрифугированием для кислотостойкого окрашивания. Это улучшает диагностику, хотя некоторые умеренно кислотостойкие организмы трудно отличить от микобактерий.

Флуоресцентное окрашивание

Флуоресцентное окрашивание позволяют обнаружить возбудителей при более низких концентрациях (< 1 × 104 клеток/мл). Примеры:

  • Акридиновый оранжевый (бактерии и грибы)

  • Аурамин-родамин и аурамин О (микобактерии)

  • Калькофлюор белый (грибы, особенно дерматофиты)

Соединение флуоресцентного красителя с антителом, направленным на болезнетворный микроорганизм (прямая или непрямая иммунофлюоресценция), увеличивает чувствительность и специфичность диагностики. Однако эти анализы трудно читать и интерпретировать, и немногие (например, прямые флуоресцентные анализы антител Pneumocystis и Legionella) коммерчески доступны и обычно используются.

Срезы нефиксированной ткани (влажные препараты)

Срез нефиксированной ткани неокрашенных образцов может быть использован с помощью темнопольной микроскопии для обнаружения следующего:

Обнаружение грибков может быть улучшено применением 10%-ной гидроокиси калия, чтобы растворить окружающие ткани и негрибковые организмы.

Окрашивание тушью (коллоидный углерод)

Окрашивающая тушь используется, чтобы обнаружить главным образом Cryptococcus neoformans Криптококкоз Криптококкоз – это легочная или диссеминированная инфекция, приобретенная при вдыхании почвенной пыли, зараженной инкапсулированными дрожжевыми грибками Cryptococcus neoformans or C... Прочитайте дополнительные сведения Криптококкоз и другие скрытые грибки во взвеси отмытых клеток (например, осадок спинномозговой жидкости). Окрашивается второстепенная область, а не организм непосредственно, что дает возможность увидеть любую капсулу вокруг организма как ореол. В спинномозговой жидкости тест не столь чувствителен, как при обнаружении криптококкового антигена. Специфичность метода также ограничена: лейкоциты могут казаться скрытыми возбудителями.

Серебрение по методам Вартин-Старри и Дитерле

Данное окрашивание используется для визуализации таких бактерий, как

Окрашивание по Райту и Гимзе

Это окрашивание используется для обнаружения следующего:

Трихромное окрашивание (окраска Гомори – Уитли) и окрашивание железным гематоксилином

Эти красители используются, чтобы обнаружить кишечных простейших.

Краситель Гомори – Уитли используется, чтобы обнаружить микроспоридии. Он может не выявить яйца гельминтов и их личинки; не всегда достоверно идентифицирует Cryptosporidium. Грибы и клетки человека также окрашиваются.

Железный гематоксилин дифференцированно окрашивает клетки, включения клеток и ядра. Яйца гельминтов могут окраситься в слишком темный цвет, что затрудняет идентификацию.

Вид
ПРИМЕЧАНИЕ: Это — Профессиональная версия. ПОЛЬЗОВАТЕЛИ: Просмотреть пользовательскую версию
quiz link

Test your knowledge

Take a Quiz! 
ANDROID iOS
ANDROID iOS
ANDROID iOS
НАВЕРХ