Sangre

Especies de Babesia

Frotis grueso y fino, igual que para las especies de Plasmodium

Obtener de la misma manera que para las especies de Plasmodium.

Usar tinción de Wright o Giemsa.

La morfología es similar a la de las formas anulares de las especies de Plasmodium, aunque sin pigmento ni granulocitos. Las tétradas confirman el diagnóstico de las especies de Babesia, pero son infrecuentes.

Los frotis de sangre de tipo gota gruesa pueden ser difíciles de interpretar y deben ser analizados solo por un microscopista experimentado.

Filarias

Muestras de gota gruesa y fina a partir de 1 mL de sangre anticoagulada; si la primera muestra es negativa, 5–10 mL, concentratados mediante centrifugación o filtración

Microfilarias de Wuchereria bancrofti y Brugia malayi: extraer sangre entre las 10 de la noche y las 2 de la mañana.

Loa loa, Dipetalonema perstans y Mansonella ozzardi: extraer sangre entre las 10 de la mañana y las 6 de la noche.

Use tinción de Giemsa o hematoxilina-eosina directamente o, para mayor sensibilidad, después de la concentración en formalina al 2% (técnica de Knott) o después de la filtración a través de una membrana Nucleopore.

Especies de Plasmodium

Frotis grueso y fino de sangre capilar (es decir, punción digital o del lóbulo de la oreja con una lanceta desechables) o 5-10 mL de sangre fresca anticoagulada (de ser posible en tubos que contengan EDTA)

Obtener varias muestras durante la enfermedad aguda.

Preparar los frotis con sangre capilar o sangre anticoagulada dentro de las 3 horas siguientes a la recolección.

Usar tinción de Wright o Giemsa.

Confirmar que los portaobjetos estén limpios.

Especies de Trypanosoma

Frotis finos de sangre capilar o 5-6 mL de sangre anticoagulada

Recolectar sangre capilar o anticoagulada. Frotis en portaobjetos.

Se utilizan varias técnicas de concentración para aumentar la sensibilidad.

Los tripanosomas móviles se observan en preparaciones húmedas; la tinción de Giemsa (o Field) se usa para identificarlos en preparaciones fijadas.

Médula ósea, otros tejidos reticuloendoteliales o líquido cefalorraquídeo

Especies de Leishmania (leishmaniasis visceral)

Material aspirado de la médula ósea, el bazo, el hígado o ganglios linfáticos o frotis de la capa leucocitaria

Frotis en portaobjetos.

Use tinción de Giemsa, Wright-Giemsa o hematoxilina-eosina.

Naegleria

Acanthamoeba

Balamuthia

Líquido cefalorraquídeo fresco

Usar una técnica de recolección aséptica.

Examinar la muestra tan pronto como sea posible.

Examinarla con microscopia óptica o con contraste de fase.

Los parásitos pueden detectarse por sus movimientos, pueden fijarse y teñirse con Giemsa y cultivarse.

Rhodesiense

Trypanosoma brucei gambiense

Material aspirado de ganglios linfáticos o chancro

Líquido cefalorraquídeo fresco

Usar una técnica de recolección aséptica.

Usar preparados húmedos para identificar parásitos móviles o fijar y teñir con Giemsa o tinción de Field antes o después de la concentración de la muestra por centrifugación.

Aspirado duodenal o biopsia yeyunal

Especies de Giardia

Especies de Cryptosporidium

Especies de Cystoisospora

Especies de Cyclospora

Microsporidia

Especies de Strongyloides

Muestra de aspirado duodenal o biopsia yeyunal

Examinar los aspirados de inmediato o fijarlos y teñirlos. Haga un examen histopatológico de las muestras de biopsia.

La identificación de huevos o larvas de Strongyloides requiere un preparado húmedo. Pueden usarse varias tinciones para arribar al diagnóstico (véase Heces más adelante para conocer más detalles).

La microscopia electrónica de transmisión ha sido el método principal para la detección y la identificación de especies de microsporidios.

Biopsia rectal

Schistosoma mansoni

Schistosoma japonicum

Biopsia rectal del pliegue dorsal (válvula de Houston) a alrededor de 9 cm del ano

Fijar para el examen histológico y aplastar un fragmento entre portaobjetos para aumentar la sensibilidad de la detección.

La identificación de la especie se basa en la morfología de los huevos.

Sigmoidoscopia (proctoscopia)

Entamoeba histolytica

Raspado fresco con una cureta o una cuchara de Volkmann, un fragmento de mucosa que se haya desprendido por la acción de un instrumento quirúrgico o material aspirado de una lesión con una pipeta de 1 mL con una perita de goma en el extremo (los hisopos no obtienen muestras satisfactorias)

Examinar la muestra de inmediato o después de su fijación y coloración.

Usar preparados húmedos o preparados fijados y teñidos (p. ej., con tricrómico) para detectar los trofozoítos y los quistes. Las heces deben examinarse en busca del antígeno o el DNA de E. histolytica; estas pruebas son más sensibles y pueden diferenciar E. histolytica de E. dispar y otras amebas no patógenas.

Heces

Especies de Cryptosporidium

Varias muestras de heces recién eliminadas (≥ 3) recolectadas todos los días o en días alternos

Refrigerar y examinar muestras recién eliminadas, conservarlas en formol u otro fijador.

Manipular con cuidado ya que las muestras frescas y las conservadas en dicromato son infecciosas.

El aspirado duodenal o la biopsia pueden ser diagnósticos.

Examinar preparados húmedos con microscopia óptica convencional, contraste con interferencia diferencial y de inmunofluorescencia.

Colorear las muestras con a tinción de ácido alcohol modificada o de safranina modificada. Las pruebas para identificar antígenos o DNA en materia fecal son más sensibles.

Especies de Cyclospora

Varias muestras de heces recién eliminadas recolectadas todos los días o en días alternos

Las muestras deben refrigerarse y examinarse en fresco o congeladas, o conservarse en formol al 10% o dicromato de potasio al 2,5%. Diferentes pruebas de laboratorio requieren distintas técnicas de preservación. Las técnicas de concentración aumentan la sensibilidad.

Examinar preparados húmedos con microscopia óptica convencional, microscopia de contraste con interferencia diferencial de luz brillante y con microscopia de fluorescencia ultravioleta. Los ovoquistes son autofluorescentes bajo luz ultravioleta. Las muestras fijadas pueden teñirse con colorante ácido alcohol modificado o safranina modificada. Un ensayo de esporulación puede diferenciar Cyclospora de algas azul-verdes.

Las pruebas para identificar DNA en las heces son más específicas y más sensibles.

Especies de Cystoisospora

Varias muestras de heces recién eliminadas recolectadas todos los días o en días alternos

Examen en fresco o conservación en formalina u otro fijador. Las técnicas de concentración aumentan la sensibilidad.

Los ovoquistes pueden observarse en preparados húmedoss con microscopia de contraste con interferencia diferencial en luz brillante o epifluorescencia. Las muestras fijadas deben teñirse con ácido alcohol modificado. Cuando las heces son negativas, el examen de aspirado duodenal o una muestra de biopsia puede ser diagnóstica.

Entamoeba dispar

Entamoeba histolytica

Otras amebas

Se recolectan varias muestras de heces recién eliminadas (≥ 3) por la mañana

Examinar muestras sin formar o diarreicas antes de que transcurran 15 minutos de la deposición.

Conservar las heces formadas en el refrigerador hasta su evaluación. Conservar en formalina u otro fijador.

Usar preparados húmedos y tinciones permanentes (p. ej., tricrómico) y técnicas de concentración para detectar los quistes.

Deben examinarse las heces en busca del antígeno específico o DNA de E. histolytica, que es más sensible y puede distinguir a E. histolytica de E. dispar y otras amebas no patógenas.

Especies de Enterobius

Huevos recolectados del área perianal sobre una tira de celofán y colocados en un portaobjetos

Se recolectan muestras del área perianal por la mañana antes de una deposición o del baño.

Los huevos de Enterobius se observan en ocasiones en muestras de heces, o en contenidos vaginales obtenidos durante una prueba de Papanicolaou. Se pueden observar gusanos adultos en la región perianal o en la vagina.

Especies de Giardia

Múltiples muestras de heces recién eliminadas (≥ 3) recolectadas en días alternos por la mañana

Examen en fresco o conservación en formalina u otro fijador. Los trofozoítos también se pueden detectar en aspirados duodenales.

Examinar muestras directos y concentradas. Los quistes generalmente se observan en preparados húmedos y los trofozoítos se observan en portaobjetos fijados con tricrómico. Las pruebas para identificar antígenos o DNA en materia fecal son más sensibles.

Microsporidia

Varias muestras de heces recolectadas todos los días o en días alternos

Pueden requerirse biopsias del intestino delgado si la evaluación de las heces es negativa.

Las muestras teñidas con métodos cromotrópicos son las empleadas con mayor frecuencia. Los agentes quimiofluorescentes como calcoflúor blanco también pueden utilizarse para la identificación rápida de estos microorganismos.

La microscopia electrónica es el método más sensible y se emplea para definir la especie.

Existen ensayos de DNA en heces o tejidos para algunas especies.

Cestodos (tenias)

Nematodos (gusanos redondos)

Ascaris

Anquilostoma

Strongyloides

Trichuris

Trematodos (duelas)

Otros

Múltiples muestras de heces recolectadas todos los días (se necesitan hasta 7 para Strongyloides)

Refrigere la muestra y examine en fresco, o fije en formol al 10% y concéntre el sedimento con acetato de etilo.

En la infección por Strongyloides, se detectan larvas activas; en el resto de las helmintiasis intestinales, se identifican huevos.

Si la materia fecal se mantiene a temperatura ambiente, los huevos del anquilostoma pueden incubarse y liberar larvas que se pueden distinguir de las larvas de Strongyloides.

Cuando se sospecha Strongyloides y el examen directo es negativo, se deben realizar una o más de las siguientes pruebas especializadas en heces; concentración de formalina-acetato de etilo, recuperación de larvas mediante la técnica del embudo de Baermann, cultivo mediante el método de placa de filtro de Harada-Mori o cultivo en placa de agar.

Esputo o material aspirado de las vías respiratorias

Especies de Paragonimus

Esputo reciente

Examinar las muestras tan pronto como sea posible o conservarlas para su examen posterior.

Pueden ser necesarias técnicas de concentración. En ocasiones hay huevos en el líquido pleural.

Especies de Strongyloides (hiperinfección)

Esputo, cualquier material aspirado, líquido obtenido por lavado broncoalveolar o material de drenaje

Examinar las muestras tan pronto como sea posible o conservarlas para su examen posterior.

Pueden identificarse larvas activas en preparados húmedos o pueden fijarse y teñirse con Giemsa.

Biopsia de pulmón

Especies de Paragonimus

Biopsia pulmonar a cielo abierto o percutánea bajo guía fluoroscópica o tomográfica

Recoger y colocar en un recipiente estéril con solución fisiológica estéril. Preparación y tinción con Giemsa o hematoxilina-eosina.

Se pueden identificar huevos y trematodos adultos.

Piel

Especies de Leishmania (leishmaniasis cutánea)

Biopsia de un área no ulcerada de la lesión e improntas citológicas o raspados

Búsqueda de amastigotes en preparaciones por impronta o frotis teñidos con Giemsa y en muestras de biopsia teñidas con hematoxilina-eosina.

Los amastigotes de LeishmaniaLson morfológicamente indistinguibles de los de Trypanosoma cruzi. Leishmania puede cultivarse a partir de biopsias de piel, pero el crecimiento in vitro puede llevar semanas. Existen ensayos moleculares para DNA de Leishmania.

Onchocerca volvulus

En los pacientes infectados en África, deben usarse cortes de piel del muslo, los glúteos o la cresta ilíaca

En los pacientes infectados en Latinoamérica, deben obtenerse cortes de piel de la cabeza, la escápula o los glúteos

Para cortar la piel, esta se desinfecta con alcohol, se inserta una aguja de diámetro 25 justo debajo de la epidermis, se levanta y se corte un pequeño trozo de tejido con un bisturí o una hoja de afeitar, o se usa una herramienta de biopsia por punción esclerocorneal. No deben provocarse hemorragias. Examen en fresco, o fijación en metanol y tinción con Giemsa o hematoxilina-eosina.

Deben examinarse muestras suspendidas en solución fisiológica para detectar microfilarias móviles que migran de la lesión en la piel. Las microfilarias pueden observarse en los cortes de tejidos.

Secreciones o biopsia urogenital

Schistosoma haematobium, en ocasiones S. japonicum

Orina recién emitida o biopsia vesical, en particular del área circundante al trígono

El horario recomendado para la recolección de la orina es entre el mediodía y las 3 de la tarde. La centrifugación aumenta la detección.

Los huevos se pueden identificar en preparados húmedos de orina o en muestras de biopsia de la vejiga.

Especies de Trichomonas

Hisopados estériles de la vagina, la uretra o secreciones prostáticas colocados en un tubo con una pequeña cantidad de solución fisiológica estéril

Indicarle a la paciente que no se duche entre 3 y 4 días antes de la recolección de la muestra.

Enviar la muestra al laboratorio tan pronto como sea posible.

La identificación de microorganismos móviles en preparados húmedos es el método más rápido. El anticuerpo de fluorescencia directa en busca de parásitos es más sensible y el cultivo es el método más sensible, pero tarda entre 3 y 7 días. Existen pruebas de amplificación de ácidos nucleicos.